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多發性硬化(Multiple Sclerosis, MS)是一種作用在中樞神經系統的多發性炎性自身反應性疾病，主要是由免疫細胞靶向攻擊自身神經細胞髓鞘而導致的自身免疫性疾病，并伴隨著中樞神經系統炎癥、脫髓鞘及后期神經功能障礙等多種癥狀[1]。目前尚無完全治愈MS的醫療措施，多種療法僅能控制和減輕疾病進展。
實驗性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)是一種以特異性致敏的CD4+T細胞介導為主的，以中樞神經系統內小血管周圍出現單個核細胞浸潤及脫髓鞘為特征的自身免疫性疾病，其病理變化與多發性硬化MS[2]類似。由于MS樣本不易獲取，因此EAE動物模型是研究MS病理過程、發病機制的重要途經，在臨床神經免疫學的研究中具有重要意義。EAE已被廣泛用作確定MS藥物療效和探索MS疾病新療法的代表性模型。
目前常用的EAE模型：髓鞘堿性蛋白(MBP)誘導Lewis大鼠模型、髓鞘蛋白脂質蛋白(PLP)誘導PL/J小鼠模型、髓鞘少突膠質細胞糖白( MOG)誘導C57BL/6小鼠模型。
PART 01
MBP誘導的Lewis大鼠模型
MBP是由中樞神經系統少突膠質細胞和周圍神經系統施旺細胞合成分泌的堿性蛋白，在神經髓鞘形成過程中發揮重要作用，它可以保持髓磷脂的正確結構，并維持與髓鞘膜中脂質的相互作用。MBP占髓鞘總蛋白的40%，是髓鞘中抗原性最強的蛋白質。
MBP可激活體內Th+細胞，使之穿過血腦屏障，攻擊自身神經髓鞘的MBP，從而導致中樞神經白質脫髓鞘，導致中樞神經系統炎性細胞浸潤和髓鞘脫失。MBP與佐劑的混合乳劑皮下注射至Lewis大鼠體內，經過6~8天的潛伏期，誘發急性EAE癥狀。
PART 02
體重變化
EAE模型組動物體重在MBP免疫后顯著下降后緩慢恢復，但整個實驗期間均顯著低于空白對照組。
圖1 給藥前動物體重和體重變化情況
EAE模型組在MBP免疫后第8天開始發病，依據臨床評分隨機分為模型組和芬戈莫德組，其中芬戈莫德可以顯著改善大鼠體重。
圖2 給藥后動物體重和體重變化
PART 03
臨床評分
參照 Kono 等[3]提出的標準，按5分法進行。
0 分: 無神經功能缺失體征，肢體活動正常;
1 分: 鼠尾張力障礙；
2 分: 部分后肢癱瘓或步態不穩；
3 分: 完全后肢癱瘓；
4 分: 部分或完全前肢癱瘓；
5 分: 瀕死狀態或死亡。
EAE模型組臨床評分逐漸升高，在第14天達到峰值。芬戈莫德可以顯著緩解癥狀，降低臨床評分。
圖3 臨床評分
PART 04
脊髓H&E染色
脊髓HE結果顯示，模型組炎癥評分顯著高于空白對照組，芬戈莫德可以顯著降低脊髓炎癥反應。
圖4 脊髓H&E染色代表圖像
圖5 脊髓炎癥評分
PART 05
腦組織H&E染色
腦組織HE結果顯示，模型組炎癥評分顯著高于空白對照組，芬戈莫德可以顯著降低脊髓炎癥反應。
圖6 腦組織H&E染色代表圖像
圖7 腦組織炎癥評分
PART 06
脊髓LFB染色
脊髓LFB染色結果顯示，模型組脫髓鞘面積顯著高于空白對照組，芬戈莫德可以顯著緩解脊髓脫髓鞘。
圖8 脊髓LFB染色代表圖像
圖9 髓鞘LFB染色面積%
PART 07
實驗結論
EAE模型在MBP免疫后第8天開始發病，臨床評分在第14天達到峰值，然后緩慢下降直到第21天實驗終點。EAE模型在第8天開始芬戈莫德干預后，臨床癥狀癥狀顯著緩解，臨床評分顯著低于模型組。
EAE模型腦組織和脊髓炎癥水平顯著升高，脊髓出現明顯的脫髓鞘反應。芬戈莫德干預后可以顯著降低腦組織和脊髓炎癥水平，降低脊髓的脫髓鞘反應。
PART 08
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參考文獻：
[1] Weerasinghe-Mudiyanselage PDE, Kang S, Kim JS, Kim SH, Wang H, Shin T, Moon C. Changes in structural plasticity of hippocampal neurons in an animal model of multiple sclerosis. Zool Res. 2024 Mar 18;45(2):398-414.
[2]Voskuhl R R, MacKenzie-Graham A. Chronic experimental autoimmune encephalomyelitis is an excellent model to study neuroaxonal degeneration in multiple sclerosis[J]. Front Mol Neurosci, 2022, 15: 1024058.
[3]Kono, D. H. Two minor determinants of myelin basic protein induce experimental allergic encephalomyelitis in SJL/J mice[J].Journal of Experimental Medicine, 1988, 168(1):213-27.
