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PD-L1不同檢測抗體互用性比較
熙寧小課-第122期 | PD-L1免疫組化檢測抗體怎么選？(上) 主要介紹了PD-L1免疫組化檢測5種常見抗體的應用，我們會發現同一適應癥不同藥物對應的PD-L1檢測試劑盒不同，與療效相關的PD?L1陽性判讀閾值亦不相同，那么不同抗體間檢測的結果是否可以互用，陽性判讀閾值是否可以互用？
針對這個問題，目前已有較多的研究，比較有影響力的是國際肺癌研究協會（International Association for the Study of Lung Cancer, IASLC）牽頭發起的藍印計劃，藍印計劃1期研究中使用四種PD-L1 抗體（22C3、28-8、SP142和SP263）對總共38例NSCLC腫瘤標本進行了染色，三位病理醫生獨立評估了染色結果，判讀閾值采用所有抗體對應cut-off值，28-8和22C3抗體為TC≥1%染色，SP 263抗體為TC≥25%染色，SP142抗體為TC≥1%染色或PD-L1陽性IC（TC1/IC1）面積占比≥1%。
PART 01
不同抗體染色一致性研究
分析比較表明，當使用22C3、28-8和SP263抗體時，PD-L1染色的腫瘤細胞的百分比一致率較高，而SP142抗體總體上顯示出腫瘤細胞膜染色較弱、陽性腫瘤細胞較少、敏感性較低的結果，與另外三種抗體相比存在偏離。不同抗體免疫細胞染色結果差異性高于腫瘤細胞染色結果（圖1）。
圖1每種抗體測定的腫瘤細胞和免疫細胞染色百分比的分析比較[6]
PART 02
基于不同抗體cut-off值患者分類一致性研究
通過比較不同抗體檢測結果陽性患者分類，來評估臨床診斷的一致性。在38例樣本中，50%（19/38）的樣本在四種抗體的檢測中均顯示高于其cut-off值，13.1%（5/38）的樣本在四種抗體的檢測中均顯示低于其cut-off值，而36.9%（14/38）的樣本在四種抗體的檢測中顯示出不一致的分類結果（圖2）。其中SP263抗體檢測結果顯示高于閾值的樣本較少，因為與28-8和22C3的1%閾值相比，25%的TC染色閾值更高。SP142檢測染色的腫瘤細胞較少，因此腫瘤細胞評分高于閾值的樣本較少，但由于額外評估免疫細胞染色，又有6例樣本高于閾值，陽性率得到了補償（圖2）。
圖2 高于或低于臨床分析閾值的病例比較[6]
注：展示了用四種PD-L1 抗體檢測結果分類的一致率，淺灰色表示低于閾值，深灰色表示高于閾值。
PART 03
不同抗體cut-off值互用性研究
另外也對不同抗體所采用的cut-off值進行了互用性研究，22C3 采用28-8 或SP263對應的 cut-off值，28-8采用22C3或SP263對應的cut-off值，及SP263采用22C3或28-8對應的 cut-off值進行判讀，結果表明，不同組合下所判讀結果與自身抗體cut-off判讀結果的一致率為86.8％~94.7％；SP142采用22C3、28-8和SP263的cut-off判讀，一致率僅為63.2％~65.8％；22C3、28-8 和SP263采用SP142判讀標準，一致率僅為81.6％~86.8％。盡管研究中22C3、28-8和SP263染色相似，但22C3采用28-8或SP263對應的cut-off值，28-8采用22C3或SP263對應的cut-off值，以及SP263采用22C3或 28-8對應的cut-off值判讀仍存在5.3％～13.2％的不同，所以采用不同的判讀結果可能直接影響治療方案的選擇（表1）。
表1 分析比較：當染色抗體與臨床cut-off值“不匹配”時，
患者分類的總體一致率[6]
PART 04
小結
隨后的藍印計劃2期研究加入了大家熟悉的73-10檢測抗體，與22C3和28-8一樣，73-10抗體為阿維魯單抗的診斷試劑。藍印計劃2期研究也擴大了樣本量、樣本類型及病理醫生的團隊，以便更好的評估真實世界臨床樣本結果，該研究在81例肺癌樣本中使用22C3、28-8、SP142、SP263及73-10抗體進行檢測， 2期研究確認了1期的研究結論：28-8、22C3和SP263三種抗體檢測腫瘤細胞具有一致性，SP142 檢出陽性細胞較少，敏感性低，新加入的73-10抗體相比于其他抗體可檢出更多的陽性細胞，表現出更高的靈敏度（圖3）。
多項研究表明，E1L3N與22C3、28-8、SP263抗體有著良好的一致性 [8-13]，雖然各項研究結果表明，E1L3N、22C3、28-8和SP263一致性較高，但目前的指南仍然認為，尚缺乏足夠的前瞻性臨床研究證據支持抗體間檢測結果互用的可行性，仍建議根據不同的抗PD-1或PD-L1藥物選擇其對應的PD-L1檢測抗體克隆及相應的檢測平臺。
圖3 PD-L1在5種抗體中的染色結果比較[7]
熙寧生物|精翰生物PD-L1檢測服務
基于PD-L1抗體間檢測結果互用可行性研究，熙寧生物|精翰生物建立了PD-L1檢測的多種抗體平臺，包括22C3、28-8、SP263、E1L3N四種主流的靈敏度、特異性、一致性表現優異的抗體。熙寧生物|精翰生物緊跟最新藥物研發需求，致力于為申辦方提供全面的PD-L1表達檢測平臺。熙寧生物|精翰生物免疫組化實驗室擁有BenchMark Ultra，Dako Autostainer Link 48，Leica Bond III等PD-L1不同抗體適配的全自動免疫組化染色平臺，已建立了PD-L1檢測標準化操作流程，成功完成22C3、28-8、SP263、E1L3N 4種抗體檢測方法學開發及性能驗證，可支持申辦方根據對標藥物對應的診斷抗體按需選擇。
4種抗體22C3、28-8、SP263、E1L3N部分檢測數據展示：
熙寧生物|精翰生物免疫組化平臺多次高分通過國內外權威機構舉辦的室間質評，全流程標準化操作與質量控制也獲得權威機構的充分認可，能夠為客戶提供精準優質的技術服務和嚴謹細致的質量保證。
PD-1/PD-L1免疫治療患者入排檢測服務
免疫治療中針對EGFR及ALK陰性非小細胞肺癌患者入排檢測，熙寧生物|精翰生物NGS和PCR平臺有多款產品可以支持，針對HER2陰性胃癌和三陰性乳腺癌患者入排檢測，熙寧生物|精翰生物的IHC、FISH和CISH平臺也可以很好地滿足該檢測需求，具體的樣本檢測周期亦可結合申辦方需求進行合理調整。
熙寧生物 | 精翰生物病理檢測及CDx開發
熙寧生物|精翰生物免疫組化實驗室擁有BenchMark Ultra，Dako Autostainer Link 48，Leica Bond III等國際公認的全自動免疫組化染色平臺，遵從CAP和GCP體系要求，按照“合規、精準、伴隨診斷”的理念，成功完成包括PD-L1、Claudin18.2、HER2、HER3、TROP-2、dMMR、TIM-3、MSLN、B7H3等超200種靶標的免疫組化方法開發，且多種方法已獲得NordiQC、CAP、CCPI等國內外權威機構的認可。
除上述提到的免疫組化檢測，熙寧生物|精翰生物免疫組化實驗室還可支持H&E染色，免疫組化（單染，雙染），mIHC，FISH，特殊染色等技術服務，滿足臨床試驗檢測需求。
對于客戶的伴隨診斷需求，我們已篩選出了多株具有伴隨診斷開發價值的單克隆抗體并完成了前期的試劑盒開發，可為廣大藥企客戶提供伴隨診斷試劑盒開發服務，歡迎致電咨詢。
部分IHC結果展示
參考文獻
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